Die Abklärung von verdächtigen rheumatischen Symptomen erfolgt hauptsächlich über serologische Beurteilungskriterien/Detektion der erkrankungsspezifischen Antikörper (z.B. anti-nucleäre Antikörper, ANAs).

Trotz der Entwicklung von Enzyme- linked immunosorbent Immunoassays (ELISA) und anderen alternativen Methoden oder Technologien ist das Screening auf ANAs mit Hilfe der IIF- Assays der Goldstandard des derzeitigen diagnostischen Ansatzes für die systemischen rheumatischen Erkrankungen wie zum Beispiel systemischer Lupus Erythematodes (SLE), Sjögren Syndrom (SS), progressive systemische Sklerodermie (PSS), Dermatomyositis/Polymyositis (DM/PM) or Mixed connective-tissue disease (MCTD).

Internationale Leitlinien empfehlen das ANA- Screening auf humanen Epithelzellen (HEp-2). Andere Zellsubstrate wie zum Beispiel Crithidia luciliae (zur Detektion von Autoantikörpern gegen dsDNA) und humane Granulozyten (zur Detektion von neutrophilen zytoplasmatischen Autoantikörpern, ANCA) werden routinemäßig in zellbasierten IIF- Techniken eingesetzt.

Seitdem Autoantikörper charakteristische Fluoreszenzmuster auf Substraten auslösen, deren Analyse von dem Wissen und der subjektiven Interpretation des Untersuchenden abhängt, stellt die hohe intra- und inter- Laborvariabilität ein Hauptproblem in der Diagnostik von Autoimmunerkrankungen dar.

Der Anstieg der Arbeitsbelastung und das Bedürfnis nach Standardisierung und reproduzierbaren Beurteilungen von zellbasierten IIF-Tests haben Autoimmunlabore auf den Weg zur Automation geleitet.

Das neue ZENIT G-SIGHT System von A. Menarini Diagnostics wurde eigens für IIF- spezifische Belange gestaltet, damit ist es besonders für die automatisierte serologische Diagnose von Autoimmunerkrankungen in dem Umfeld eines Routinelabors geeignet.

Hauptschritte der Methode:

1. Probenverdünnung (z.B. 1:80) und Inkubation mit auf dem Objektträger fixierten Substrat in einer feuchten Kammer bei Raumtemperatur
2. Inkubation mit Fluoreszein- Isothiocyanat (FITC)-Schaf anti human Ig- Konjugat für 30min bei RT
3. Beurteilung: visuelle oder automatisierte Auswertung des Objektträgers

ANA Detektion auf Hep-2 Zellen generiert spezifische Fluoreszenzmuster. Die fünf Hauptmuster, die man erkennen kann, sind folgende:

* Es werden ANA Fluoreszenzmuster auf den HEp2-Zellen gezeigt, weil dies der weitverbreitteste Test zum visuellen/automatischen Screening von rheumatischen Erkrankungen ist.

Die innovative ZENIT G-SIGHT Software ist zentraler Bestandteil des Systems. Sie garantiert optimale Bilderfassung und -bearbeitung, voll automatisierte Analyse der Immunfluoreszenzsignale sowie effektive Datenarchivierung und -management. ZENIT G-SIGHT Software verwaltet und kontrolliert den gesamten experimentellen Workflow.

DIGITALE BILDERSTELLUNG
Die Software des ZENIT G-SIGHT liest Bilder automatisch aus und generiert editierbare, hochauflösende JPEG2000 Dateien (30 - 50 mB pro Well). Mittels digitaler Vergrößerung können anschließend vergrößerte Bilder erstellt werden.

BILDINTERPRETATION / BEWERTUNG
Die Software des ZENIT G-SIGHT bearbeitet die Fluoreszenzsignale und gewährleistet ein objektives Auslesen: sie analysiert automatisch die Signalintensität und -verteilung in jeder Probe.
Um die Gefahr "falsch negativer" Befunde zu minimieren wurde ein Cut-Off Level eingerichtet. Nach dem Schritt der positiv-negativ Differenzierung ordnet ein mathematischer Algorithmus die generierte Fluoreszenz automatisch z.B. einem der fünf Hauptmerkmale der HEp-2 Substrate zu.
Das System liefert ebenso semi-quantitative Ergebnisse, basierend auf positiven Identifikationskriterien (für die Hep-2 Zellen wurden 10000 lU von DsDNA-mAb33, Artikelnummer 33300 korriliert mit WHO Standard Wo/80 als Referenzmaterial genutzt, um die absolute Konzentration/Fluoreszenzemissionsrate zu berechnen).

ildarchiv
Nach Abschluss des manuellen Validationsverfahrens beginnt die ZENIT G-SIGHT Software mit der Archivierung der Immunfluoreszenzbildern. Das System bietet ausreichend Speicherkapazität für rund 5000 Objektträger*.

Abfragen und Teilen von Daten
Die Suchfunktion der ZENIT G-SIGHT Software ermöglicht einfaches Abfragen bisheriger Ergebnisse.
Online Datenzugriff und Datenaustausch sind ebenso möglich.

Workflow Management
Die intuitive, benutzerfreundliche Oberfläche der ZENIT G-SIGHT Software begleitet den Anwender Schritt für Schritt durch den gesamten Prozess des Autoantikörpernachweises:

* abhängig von der Festplattenkapazität;

** ZENIT G-SIGHT kann mit LIS sowie allen Liquid-Handling-Systemen der Zenit Serie von A. Menarini Diagnostics zur automatischen Vorbereitung von IIF Proben verbunden werden